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IP/CoIP/CoIP-MS

实验介绍

蛋白质相互作用研究

免疫共沉淀(co-IP)以细胞内源性靶蛋白为诱饵,将靶蛋白抗体与细胞总蛋白进行共孵育,促进免疫复合物的形成;随后加入能够与抗体FC段结合的protein-A/G(预先结合固化在琼脂小珠上),形成“结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-proteinA/G小珠”复合物,采用SDS-PAGE胶分离蛋白,并用Western blot方法进行蛋白检测,该种方法在非变性条件实验条件下进行,蛋白质之间的天然相互作用得以最大程度地保留,可以比较真实的反应蛋白质之间的相互作用,但Co-IP的缺点是不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的。

融合蛋白pull-down基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),当细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。如将目的基因构建至GST(Glutathione S transferase)标签载体上,GST融合蛋白在经过固定有GST(glutathione)的色谱柱时,就可以通过GST与GSH的相互作用而被吸附。当含有兴趣蛋白的细胞抽提物通过层析柱时,就可以与“诱饵”蛋白相互作用而被吸附分离。该方法用于体外验证两个蛋白是否有相互作用,或者寻找可能与目的蛋白有相互作用的靶蛋白。GST Pull-down实验可以通过体外实验条件,去除其它蛋白的影响,从而确定目的蛋白和待检测蛋白是否可以发生直接相互作用。

蛋白质相互作用研究+质谱分析(IP+MS)

免疫共沉淀与质谱结合,不仅能验证已知蛋白的相互作用,而且还可以鉴定与目标蛋白互作的未知蛋白,实现对免疫共沉淀结果的进一步确证。 

服务流程

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客户提供

●   新鲜蛋白样品(或细胞或组织)(可选)

●   兴趣蛋白与靶蛋白基因相关序列(可选)

●   阳性对照

●   相关参考文献

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服务优势

●   标准化的质粒构建流程

●   丰富的哺乳动物细胞培养及转染经验

●   高效的Co-IP及Western-Blotting/MS互助平台

●   真实清晰完整的报告呈现


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