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在急性T淋巴细胞白血病中研究HSP90对NOTCH1的稳定作用

日期:2017-04-05

课题研究思路

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一、研究阻断HSP90后对细胞功能的影响

       ●  细胞活力(CCK8

 采用不同浓度HSP90抑制剂(17-AAG/PU-H71)处理不同T-ALL细胞,检测对细胞活力的影响。

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       ●  细胞凋亡(Annexin V-PI法)

  采用不同HSP90抑制剂(17-AAG/PU-H71)处理不同T-ALL细胞,检测对细胞凋亡的影响。

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二、研究阻断HSP90后对NOTCH1信号通路的影响

       ●  HSP90抑制剂作用对NOTCH1蛋白表达的影响(Western-Blotting法)

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       ●  HSP90抑制剂作用对NOTCH1不同下游靶基因转录的影响(Real-Time PCR检测)

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       ●  shHSP90干扰HSP90功能对NOTCH蛋白表达的影响(慢病毒感染/Western-Blotting法检测)

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三、分子研究机制

       ●   研究HSP90与NOTCH1的体内外相互作用(Co-IP)

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       ●   研究HSP90抑制剂对NOTCH1靶基因转录的阻断是否通过影响NOTCH1与靶基因启动子的结合(ChIP)

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       ●   研究HSP90抑制剂如何抑制NOTCH1蛋白表达(Protein decay assay/泛素化研究)

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至此上述机制解释了HSP90抑制剂通过促进NOTCH1泛素化降解从而对NOTCH1信号通路产生抑制,进而引起T-ALL细胞活力受控、凋亡增加的生物学功能。

四、参考文献

Wang ZHu YXiao DWang JLiu CXu YShi XJiang PHuang LLi PLiu HQing G. Stabilization of Notch1 by the Hsp90 Chaperon is Crucial for T Cell Leukemogenesis. Clin Cancer Res. 2017 Jan 31.


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